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Effects of Acupuncture at Varying Depths at the Connecting Point on the Changes of Levels of nNOS, No and Norepinephrine in Rats
수삼양경 락혈의 깊이별 침자가 백서의 nNOS, NO 및 Norepinephrine의 변화에 미치는 영향
Korean Journal of Acupuncture 2015;32:160-168
Published online December 27, 2015;  https://doi.org/10.14406/acu.2015.028
© 2015 Society for Meridian and Acupoint.

Yumi Lee1, Wook Shin1, Kyoungin Lee2, Donghee Choi1, Mirae Kim1, Changsu Na1, Sunmin Kim2, Byoungsik Pyo2, and Daehwan Youn1
이유미1, 신욱1, 이경인2, 최동희1, 김미래1, 나창수1, 김선민2, 표병식2, 윤대환1

1College of Korean Medicine, Dongshin University,
2Biotechnology Industrialization Center, Dongshin University
1동신대학교 한의과대학,
2동신대학교 생물자원산업화지원센터
Correspondence to: Daehwan Youn Department of Meridian and Acupoint, College of Korean Medicine, Dongshin University, 185 Gunjae-ro, Naju 58245, Korea Tel: +82-61-330-3527, Fax: +82-61-330-3519, E-mail: human22@dsu.ac.kr
Received December 1, 2015; Revised December 14, 2015; Accepted December 14, 2015.
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
Abstract

Objectives:

This study was intended to observe the changes in the expression of neurotransmitters, such as nNOS, NO and NE upon the needle insertion at varying depths at the connecting point.

Methods:

Needles were inserted into rats, on both left and right sides of the connecting point, including the LI6, SI7 and TE5 acupoints which are three yang meridians of the hand. After insertion, needles were retained for five minutes. Each acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint and at the depths of superficial, middle and deep layer. After the retention, blood was drawn via cardiac puncture, and tissues of each point near meridian vessels were extracted to examine the changes in the expression of nNOS, NO and NE.

Results:

In terms of the effect in nNO production, there was a significant increase only in the middle and deep layer at SI7 acupoint, but there was no significant change in the expression of NO. Regarding the formation of norepinephrine within tissues, the middle layer on LI6 acupoint, the middle layer and the deep layer on TE5 acupoint showed a significant increase, while production of plasma norepinephrine was significantly decreased at the middle layer and the deep layer on LI6 acupoint and the deep layer on SI7 acupoint.

Conclusions:

The effect of needles applied at the connecting point of three yang meridians on the activities of nNOS, and NE could be observed, and it can be induced that the effect of needle stimulation on disrupted nervous system can be examined through additional researches based on this one.

Keywords: connecting point, LI6, SI7, TE5, NO, nNOS, norepinephrine(NE)
서론

經絡은 穴位들이 계통적으로 상호 연계 분류되어 생리학적, 병리학적으로 체계화된 이론체계로서 인체 내부의 五臟六腑와, 외부의 皮膚와 肢節을 연결하는 氣血運行의 통로를 말하는데1), 穴位는 흔히 뜸이나 침을 놓게 되는 혈자리이다. 穴位에 대한 유래는 어떠한 정해진 부위와 명칭이 없었던 채 생활 속의 치료경험이 축적됨으로 반복된 경험을 통해 발견하게 되면서 穴位에 대한 명확한 인식을 깊게 갖게 되었고 이를 토대로 經絡理論이 형성되었다. 穴位의 종류와 명명은 여러 기원에 있으며, 특수혈중 “絡穴”은 表裏經疾患에대하여 疏調하고 가장 常用이 되는데 이는 絡穴이 四肢에 分布함으로 臟腑와 經脈의 기능 활동에 영향을 미친다2).

neural NOS(nNOS)는 endothelial NOS(eNOS), inducible NOS(iNOS)와 함께 nitric oxide synthase(NOS)로 이루어지는 효소이며, 주로 뇌의 신경세포에 분포하는데 중주 및 말초신경계의 여러 신경세포들에서 발견되고 있다3,4). Nitric Oxide(NO)는 신경 조직, 심혈관 조직, 면역 조직에서 발견되는 유리라디칼(free radical) 로서 NOS에 인하여 생성되고5), 생물체의 생리 및 병리작용에서 중요한 역할을 하며, 혈류 조절 및 눈물샘과 침샘과 같은 분비 기능 등에 관여한다고 알려져 있다6).

혈위에 대한 nNOS, NO, NE 최신연구로는 김 등7)이 경혈 침자극이 경혈 선택점과 NOS 활성에 관계가 있고, 경혈의 침자극이 NO system에 영향을 준다고 연구한 바 있어, 혈위의 속성과 부위에 따라 혈위의 침자 작용이 발현될 수 있으며 지정한 혈위에서 발현되어지는 국소 작용이 연계되는 것을 알 수 있었으나, 신경 전달 관여물질에 및 신경 활성기전 대한 영향과 관련한 絡穴의 침자 연구보고는 미흡하여 꾸준한 연구가 필요한 것으로 보인다.

이에 지속적인 연구를 위해 먼저 본 연구에선 백서를 대상으로 수경 중 락혈의 鍼刺 시행이 신경전달 관여물질중의 하나인 nNOS, NO 및 Norepinephrine(NE)의 발현 변화를 관찰하였기에 보고하고자 한다.

재료 및 방법

1. 동물

실험동물은 16주령의 Sprague?Dawley계 수컷 白鼠들(400∼450 g, Samtaco, Korea)을 준비하여, 동신대학교 실험윤리위원회 승인을 받았고 이에 따라 사육하고 처치하였다. 사육되는 동물은 조명을 통해 12시간 간격으로 낮과 밤이 교대되도록 하였고, 항온 항습(21±2°C, 50±10%)이 유지되는 사육실에서 사육하면서 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였다.

2. 군분리

각 군들은 手陽明大腸經의 偏歷에 침자한 군(LI6, n=5), 手太陽小腸經의 支正에 침자한 군(SI7, n=5), 手少陽三焦經의 外關에 침자한 군(TE5, n=5) 등 총 9개 군으로 분리하였으며, 모든 군들은 사육단계부터 호흡마취과정까지 모두 동일하게 처치되었다.

3. 경혈 및 침자

手三陽經의 絡穴에 해당하는 3개 혈위에 대하여 구 등8)의 연구보고를 참고하여 인체에 상응하게 취혈하였다. 手陽明大腸經의 絡穴인 偏歷는 양계혈 위 3촌으로 양계와 곡지의 연결선상 손목 쪽에서 1/4, 팔굽관절 쪽에서 3/4 부위에, 手太陽小腸經의 絡穴인 支正은 양곡과 소해의 연결선의 중간지점에서 아래로 1촌 내려간 곳에, 手少陽三焦經의 絡穴인 外關은 손등 쪽 손목주름에서 위로 2촌 부위로 자뼈와 노뼈 사이의 손등 쪽 중간에 각각 취혈하였다8). 침자전에 실험동물을 80% O2와 20% N가 혼합된 가스에 5% isoflurane (Choongwae, Korea)을 이용하여 흡입마취 유도를 한 후 2% isoflurane으로 마취를 계속 유지시켰다. 마취를 유지시킨 후 각 락혈 좌우 모두에 수직으로 자침하고, 보사법을 시행하지 않은 상태에서 3분간 유침하였다. 침자에 사용된 침은 호침(0.25×15 mm, Dongbang, Korea)이었으며, 13년 침자를 시행한 경험이 있는 전문가 1인이 시술하였다.

4. 혈장준비

침자 후 3분간의 유침 과정이 끝나고 심장 천자하여 6 ml의 혈액을 채혈하였다. 혈액은 K3 EDTA(Green VAC-tube EDTA K3 liquid 3.0 mm 13×75, Greencross, Korea)에 넣고 15,000 rpm에서 20분 동안 4°C에서 원심분리(Vision Scientific, Korea)하여 혈장을 얻어 이를 NE content의 분석을 위해 급속냉동 시킨 후 ?70°C에 보관하였다.

5. 조직준비

심장 천자를 통하여 혈액을 채혈한 후 각 군들에 해당하는 手三陽經의 경혈 부위에서 깊이별로 superficial layer, middle layer (Muscle) 및 deep layer(Muscle-Bone의 바로 앞 부분)의 3부분으로 나누어 적출하였다. nNOS 및 NO assay를 얻기 위한 조직은 1X Protease Cocktail inhibitor(BD, USA)가 포함된 NP40 lysis buffer 500 μl를 넣어 homogenization하였다. 이 sample을 20분간 ice상태에 놓아둔 후 12,000 rpm에서 20분 동안 4°C에서 원심분리(Centrifuge 5415R, Germany)한 후 supernatants을 분리하였다. NE production을 얻기 위한 조직은 해당 경혈부위를 포함하는 조직을 분리하여 0.1 M perchloric acid 0.5 ml와 함께 homogenize(KIKA Works, Malaysia)하였고, 이를 10,000 rpm에서 20분 동안 4°C에서 원심분리(Centrifuge 5415R, Germany)하여 supernatants만 분리하였다.

6. Assay of nNOS

경혈 부위의 조직절편을 2% BSA와 15%의 Goat Serum으로 3시간 동안 반응시킨 후 Rabbit anti-nNOS(Invitrogen, USA), anti-iNOS(1:100, Abcam, England), anti-eNOS(1:200, Abcam, England) antibody를 0.05% Sodium azide와 2% BSA가 함유된 PBS로 희석시켜 조직을 3시간 동안 4°C에서 반응을 시킨 후 50 mM PBS에 세척하였고, Biotinylated universal Secondary Antibody (Quick Kit: Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA)에 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 그리고 50 mM PBS에 세척하고 Streptavidin peroxidase preformed complex(Quick Kit: Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA)에 10분 동안 반응시킨 후 다시 50 mM PBS에 세척하고 조직을 3,3’-diaminobenzidine 발색용액(Vector Laboratories, Burlingame, USA)으로 반응시킨 후, 반응이 끝난 후 조직을 PBS로 세척하여 hematoxyline으로 대조 염색 후 슬라이드를 dehydtration한 후에 100배의 광학현미경(Eclipse 80i, Nikon, Japan)으로 관찰하였다.

7. Assay of NO

경혈 부위의 조직 내 NO 생성량을 측정하기 위하여 Griess 시약을 이용하여 안정된 마지막 산물인 NO2와 NO3에 대해서 분석하였다. 조직의 단백질시료 40 μl와 MOPS buffer(50 mM MOPS/1 mM EDTA, pH 7.0) 45 μl를 혼합하고 reconstituted E.coli nitrate reductase 5 μl를 가한 후 2 mM NADH 10 μl를 가하여 20분 동안 실온에서 반응시킨 후 50 μl Griess reagent A(1% sulfanilamide in 3N HCl)와 반응시키고, 50 μl Griess reagent B(0.1% N-(1-naphthyl) ethylenediamine, 2HCl)와 혼합하여 실온에서 5분간 반응시킨 후 purple azo dye가 생성되면 20분 이내에 Micro plate reader(Spectra max m2e, Moleculardevices, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡수율을 측정하였다.

8. Assay of NE production

Norepinephrine 및 epinephrine 분석은 LC-MS/MS를 활용하였다. 1200 series LC(Agilent, USA)와 연결된 6410 MS(Agilent, USA)를 사용하며, positive electrospray ionization(ESI) mode로 분석을 실시하고, Column은 YMC-Pack Pro C8(150×4.6 mm, 3μm)을 사용하며, 이동상으로 5 mM ammonium acetate 및 0.1% formic acid가 혼합된 증류수와 5 mM ammonium acetate 및 0.1% formic acid가 혼합된 methanol을 0.3 ml/min의 유속으로 사용하였다. Norepinephrine과 epinephrine을 검출하기 위해 selected ion monitoring 조건으로 각각 152.1 m/z와 166.0 m/z을 사용하고 Neubulizer 압력과 capillary voltage는 각각 20 psi와 4 kV로 설정하였으며, gas flow와 온도는 10 l/min과 320°C로 유지하였다. 각 물질의 함량은 표준물질 0.125, 0.50, 2.5 ppm(μg/ ml)을 각각 standard로 하여 작성한 검량선을 사용하여 시료 중의 함량을 계산하였다.

9. 통계처리

모든 측정값은 Excel statistic program(Microsoft, USA)을 이용하여 평균치와 표준 오차(mean±standard error)로 표시하였고, 각 실험군 간의 통계학적 분석은 Window용 SPSS(SPSS, USA)를 사용하여 비모수적 방법으로 Mann-Whitney U test를 시행하였다. 각 군들의 비교에서 α=0.05와 α=0.01(p<0.05, p<0.01)수준으로 유의성을 검정하였다.

결과

1. nNOS 발현에 미치는 영향

적출한 조직을 20× 배율로 5군데에서 사진을 찍어 평균을 낸 手三經 絡穴의 깊이별 침자가 nNOS발현에 미치는 영향을 관찰한 결과, LI6군의 superficial layer는 122.8±29.47개, middle layer는 103.2±29.15개, deep layer는 92.0±23.02개를, SI7군의 superficial layer는 32.0±6.67개, middle layer는 130.0±26.27개, deep layer는 84.4±17.01개를, TE5군의 superficial layer는 41.4±9.49개, middle layer는 41.0±7.13개, deep layer는 73.0± 16.45개를 나타내었다. 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, SI7군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였다(p<0.05, Figs. 1, 2).

Fig. 1.

Effect of acupuncture at varying depths at acupoints LI6, SI7 and TE5 on immunoreactivity for neuronal nitric oxide synthase(nNOS).

Each acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint and at the depths of superficial, middle and deep layer. Data are expressed as mean±S.E.(n=5). *p<0.05 as compared with the superficial layer group.


Fig. 2.

Microphotographs of immunoreactivity pattern for neuronal nitric oxide synthase(nNOS) in rat.

LI6, SI7, TE5 groups were treated acupuncture at each acupoint. A,B,C are each depths of acupuncture points. Scale bar=200 μm.×100.


2. NO 생성에 미치는 영향

手三經 絡穴의 깊이별 침자가 NO발현에 미치는 영향을 관찰한 결과, LI6군의 superficial layer는 0.15±0.011 μM, middle layer 는 0.15±0.007 μM, deep layer는 0.16±0.013 μM을, SI7군의 superficial layer는 0.16±0.017 μM, middle layer는 0.17± 0.025 μM, deep layer는 0.20±0.011 μM을, TE5군의 superficial layer는 0.13±0.006 μM, middle layer는 0.14±0.019 μM, deep layer는 0.16±0.024 μM을 나타내었다. 각 군들 간의 비교에서 모든 실험군들에서 유의한 변화를 보이지 않았다(Fig. 3).

Fig. 3.

Effect of acupuncture at varying depths at acupoints LI6, SI7 and TE5 on the nitrite/nitrate levels.

Each acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint and at the depths of superficial, middle and deep layer. Data are expressed as mean±S.E.(n=5).


3. Tissue의 norepinephrine에 미치는 영향

手三經 絡穴의 깊이별 침자가 혈위의 tissue 내의 norepinephrine 농도 변화에 미치는 영향을 관찰한 결과, LI6군의 superficial layer는 0.46±0.071 mg/L, middle layer는 0.63± 0.026 mg/L, deep layer는 0.62±0.044 mg/L을, SI7군의 superficial layer는 0.52±0.033 mg/L, middle layer는 00.60±0.030 mg/L, deep layer는 0.58±0.039 mg/L을, TE5군의 superficial layer는 0.15±0.053 mg/L, middle layer는 0.31±0.028 mg/L, deep layer는 0.35±0.046 mg/L을 나타내었다. 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군이, TE5군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였다(p<0.05, Figs. 4, 5).

Fig. 4.

Effect of acupuncture at varying depths at acupoints LI6, SI7 and TE5 on the concentration of tissue norepinephrine.

Each Acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint and at the depths of superficial, middle and deep layer. Data are expressed as mean±S.E.(n=5). *p<0.05 as compared with the superficial layer group.


Fig. 5.

Chromatograms of tissue(upper) and plasma(lower) norepinephrine release using fluorimetric detector.

Each Acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint(LI6, SI7 and TE5) and at the depths of superficial, middle and deep layer.


4. Plasma의 norepinephrine에 미치는 영향

手三經 絡穴의 깊이별 침자가 plasma의 norepinephrine 농도 변화에 미치는 영향을 관찰한 결과, LI6군의 superficial layer는 0.03±0.003 mg/L, middle layer는 0.02±0.003 mg/L, deep layer는 0.02±0.001 mg/L을, SI7군의 superficial layer는 0.04± 0.003 mg/L, middle layer는 0.04±0.002 mg/L, deep layer는 0.03±0.001 mg/L을, TE5군의 superficial layer는 0.05±0.002 mg/L, middle layer는 0.05±0.003 mg/L, deep layer는 0.04± 0.003 mg/L을 나타내었다. 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군, deep layer군이, SI7군에서는 deep layer군이 유의하게 감소하였다(p<0.05, Figs. 5, 6).

Fig. 6.

Effect of acupuncture at varying depths at acupoints LI6, SI7 and TE5 on the concentration of plasma norepinephrine.

Each Acupuncture groups were treated acupuncture at each acupoint and at the depths of superficial, middle and deep layer. Data are expressed as mean±S.E.(n=5). *p<0.05, **p<0.01 as compared with the superficial layer group.


고찰

經穴은 經脈과 관계를 가지고 있어 本經의 病證을 主治하는 作用과 經脈과 소속된 臟腑의 病證에도 반영되며, 十二經脈과 任脈 및 督脈 上에 존재하는 모든 穴을 “十四經穴”이라 하여, “經穴”이라 칭하며 “?穴”이라고도 불린다2). 현재 이 經穴에 대해 한의학적 임상으로도 충분히 진단과 치료에 용이하다고 효과를 보인 연구로 장부의 상관관계에 따라 經穴 지점을 자극할 경우 자극 전과 후의 피부 저항이 비 經穴보다 적어 효과를 보인 사례와 함께 현대인들이 관심을 갖는 문제들에 대해 이미 鍼 치료가 약물 中毒을 위한 효과적인 치료법으로 인정받은 아래 다양한 기전을 통해 經穴 치료가 뇌 기능에 影響을 미치는 것을 확인하는 등 經穴을 통한 다양한 연구가 이루어지고 있다9).

NOS는 nNOS, eNOS, iNOS 3가지로 알려져 있으며, nNOS와 eNOS는 항상 발현되어 있어 constitutiveNOS(cNOS)라 하고, 특히 nNOS는 특정한 신경세포에 존재함으로서 자극된 신경세포내의 칼슘 이온이 증가하게 되면서 효소가 활성화 되어 신경조직에서 합성함으로 생성된 NO는 주변의 조직에 확산되어 신경전달물질의 역할을 하게 된다. 세포간의 정보 전달을 담당하고 있으며, 주로 신경조직에 발현되어서 신경전달을 담당하여, 중추신경계와 말초신경계 및 혈관계에 작용하는 것으로도 알려져 있다 5,10-12). 중추신경계에서의 nNOS 신경세포는 외부 자극에 대하여 민감하게 반응하는 신경전달 물질이다13). 하지만 저산소증, 허혈증 및 뇌졸중등의 뇌의 질병상태에서 증가된 glutamate의 농도로 인해 세포내 칼슘 이온의 증가로 생성된 NO가 신경세포에 손상이 유발되기도 한다14,15). 이와 관련된 연구 보고로 Choi 등16)은 애엽 약침이 허혈성 손상에 미치는 효과를 관찰한 결과, 허혈 손상 유발 1시간 전에 애엽 약침을 시술한 실험군에서 허혈손상 2시간 후에 허혈 손상군보다 nNOS 단백이 감소된 것을 확인할 수 있었고, 애엽 약침이 허혈 손상의 신경세포 손상을 억제할 수 있다고 보고하였으며, Lee 등17)은 足三里, 足三里配曲池, 足三里配陰陵泉에 전침 자극을 시행하고, 영상분석기의 densitometry 기능을 이용하여 nNOS 활성을 측정한 결과, 뇌 줄기 영역에서 足三里와 足三里配曲池 전침 자극군이 정상군에 비하여 유의한 감소를 보였고, 足三里配陰陵泉 전침 자극군은 足三里와 足三里配曲池 전침 자극군에 비하여 유의한 증가를 보였으며, 소뇌 영역에서는 足三里과 足三里配曲池 전침 자극군이 정상군에 비하여 유의한 감소를 보였고, 足三里配陰陵泉 전침 자극군은 足三里와 足三里配曲池 전침 자극군에 비하여 유의한 증가를 보인 결과, 足三里의 배합이 중추신경계의 NO system에 각기 다른 영향을 미치는 것을 보고하였다. Kim 등18)은 전침 효과가 nNOS 신경세포의 activity에 대한 효과를 관찰한 결과, 대뇌 겉질 영역의 nNOS 염색성 변화에서는 100 Hz군이 침자군과 2 Hz군데 비하여 일차 운동 겉질, 시각겉질, 후각뇌주위겉질 및 뇌섬겉질의 부위에서 유의한 감소를 보였고, 뇌줄기 영역의 nNOS 염색성 변화에서는 100 Hz군이 침자군과 2 Hz군에 비하여 위둔덕층, 뒤가쪽 수도관 주위회색질, para- lemniscal nucleus에서 유의한 감소를 보였으며, 소뇌 영역의 nNOS 염색성 변화에서는 100 Hz군이 가장 떨어지는 결과를 나타내었다고 보고된 바 있다. 또 Kim 등19)은 足三里와 曲池에 침자극을 시행하고 영상 분석기의 densitometry 기능을 이용하여 흰쥐의 뇌줄기와 소뇌의 신경세포에서 nNOS활성을 측정한 결과 뇌줄기 영역중 SuG와 SDLPAG에서 曲池 침자군은 정상군과 足三里침자군보다 유의한 감소를 보였고, 소뇌영역에서는 足三里 침자군과 曲池 침자군에서 nNOS의 활성이 유의한 차이가 없다는 것을 확인하여 경혈 침자극이 NO system에 영향을 주며 경혈 선택과 NOS 활성에 관계가 있다는 것을 보고하였다. 이에 본 연구에서는 nNOS발현에서 각 군의 superficial layer군에 비해, SI7군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였으나, NO발현 변화에서는 각 군들 간의 비교에서 모든 실험군들에서 유의한 변화를 보이지 않았다.

NO는 가스 형태로 질소와 산소 각각 하나로 구성된 무색, 무취의 기체로서 대기 오염의 원인이라 여겨 왔지만, Yim20)은 약 20여년 전에 NOS에 의해 합성되어 만들어짐을 밝히며 NO가 인체 내에서도 발생할 수 있고 이는 생리적 및 병리적 기능을 가지고 있는 것 이 알려진 바 있음을 보고하였다. NO는 대식세포나 간세포에서 면역자극에 의해 생성되며, 세포내의 전달자로서 면역조절 신경전달과 더불어 혈류량과 혈관의 이완을 조절하고 여러 가지 생물학적 기능을 하는데 항암 및 항 미생물 작용, 혈소판 응집 억제와 성기능 장애개선과 등의 기능을 한다21). NO는 한번 만들어지면 plasma membrane에 침투할 수 있으며 주위 세포까지도 영향을 미칠 수 있다22). 자율신경계의 교감신경의 활성이 증가되면 동공이 산대되고, 피부나 장에 분포된 혈관 수축으로 인하여 혈류가 증가하고, 에너지를 효과적으로 쓸 수 있도록 하며, 기관지가 확장되어 산소 유입량이 증가하고 심수축력과 심박동률이 증가함으로서 골격근과 뇌의 관류량이 커지게 된다. 또한, 부신수질을 자극하여 혈관내로 epinephrine과 norepinephrine을 유리시키며, 에너지 동원 기능을 활발하게 한다. 즉, 교감 신경 섬유는 많은 臟腑에 연계되어 있으며, 말초 신경계로서 작용 한다22). 부교감신경은 교감신경과 반대로 동공수축, 장의 연동 운동을 증가시키고, 심박동을 느리게 하고, 피부와 장의 혈관 이완을 유도하기도 한다. 교감신경에서 유리되는 norepinephrine은 평활근에 작용하여 피부, 피하근육 등의 말초혈관의 긴장을 증가시킨다22).

Norepinephrine은 청반핵(locus coeruleus)과 뇌간핵(brainstemnucleus)에서 신경전달물질로 이용되는데, 교감신경의 자극으로 인하여 부신수질에서 분비되는 스트레스성 호르몬으로, 이 신경전달물질로 인해 스트레스나 운동 자극에 민감한 반응을 하고, 스트레스로 인한 불면증, 집중력, 섭식 행동 등에 영향을 주며22-24), norepinephrine의 합성은 도파민 β-hydroxylase를 필요로 하며, β-hydroxylase는 도파민으로부터 norepinephrine의 생산을 촉진시키는 역할을 한다22). 이와 관련된 연구 보고로 Youn 등25)은 然谷,陰谷, 少府`, 少海 鍼刺가 norepinephrine에 미치는 영향에 대하여 관찰한 결과, 然谷, 陰谷, 少府才, 少海鍼刺 중에서 腎經의 水穴 KI10군과 心經의 水穴HT3군에서 유의한 감소를 나타내었고, 腎經의火穴 KI2군과 心經의 火穴 HT8군에서 유의한 차이를 나타내지 않았다고 보고된 바 있다. 이에 본 연구에서는 혈위의 tissue 내의 norepinephrine 농도 변화는 각 군들의 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군이, TE군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였으며, plasma의 norepinephrine 농도 변화는 각 군들의 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군, deep layer군이, SI7군에서는 deep layer군이 유의하게 감소하였다.

絡穴에 대한 刺鍼이 nNOS, NO, NE에 미치는 영향을 관찰한 결과 침자의 깊이가 심층 부위에서 Plasma 내의 norepinephrine가 LI6군, SI7군의 심층면에서 감소하는 것을 관찰되었으며, 특히 SI7군은 이와 반대로 조직 내의 nNOS가 증가되는 것으로 보여, SI7을 깊게 자극하는 것은 국소부위의 nNOS의 영향이 체내 전체의 NE의 농도의 영향과는 반비례한다는 것으로 관찰되었으며, 국소의 nNOS와 NO와 상관없이 혈위의 tissue 내의 norepinephrine의 농도를 증가시키는 혈위로는 LI6와 TE5군이며 이는 증간 및 심층부위로 자극을 주어야한다는 것을 알 수 있었다. 하지만 LI6군의 조직 내 NE감소 기전과 nNOS, NO 변화에 대한 영향에 대해서는 심도 있고 꾸준한 연구가 필요하다고 사료된다.

본 연구를 통해 경혈의 위치 및 자침 깊이의 관련성에 대해 이론을 제시하기에 부족함을 느꼈으나 혈위 및 자침 깊이에 따른 신경 전달물질 기전이 다름을 확인함으로 차후 연구를 통해 경혈 조직의 위치 및 깊이에 따른 NO, nNOS, norepinephrine의 변화, 그리고 자침 후 혈액에서의 norepinephrine의 변화가 경혈의 위치 및 자침 깊이와 어떠한 관련성이 있으며, 경혈학적으로 어떠한 의미가 있을 것인지 밝히며 신경 전달 관여물질에 및 신경 활성기전 대한 영향에 대해 정확한 이론을 제시할 수 있을 것으로 본다.

결론

手三經 絡穴의 깊이별 침자가 nNOS, NO, Norepinephrine발현에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. nNOS발현 변화를 관찰한 후, 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, SI7군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였다.

2. NO발현 변화를 관찰한 후, 각 군들 간의 비교에서 각 군들 간의 비교에서 모든 실험군들에서 유의한 변화를 보이지 않았다.

3. 혈위의 tissue 내의 norepinephrine 농도 변화를 관찰한 후, 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군이, TE5군에서는 middle layer군, deep layer군이 유의하게 증가하였다.

4. Plasma의 norepinephrine 농도 변화를 관찰한 후, 각 군들 간의 비교에서 superficial layer군에 비해, LI6군에서는 middle layer군, deep layer군이, SI7군에서는 deep layer군이 유의하게 감소하였다.

References
  1. Kim YS, CHOI DH, Jang HS, Na CS, Hwang MH, Cho JH, Lee KI, Kim SM, Pyo BS, and Youn DH. Effects of Acupuncture at ST41, BL60, GB38 on Changes of Nitric Oxide and Nitric Oxide Synthase in Rats. Korean journal of acupuncture 2013;30:97-103.
    CrossRef
  2. Meridians & acupoints compilation committee of Korean Oriental Medical colleges. Principles of meridians & acupoints; a guidebook for college students. Daejeon: JongRyeoNaMu Publishing; 2012.
  3. Im JH. A Study on Effect of Nitrooleate on Nitric Oxide Production and Endothelial Nitric Oxide Synthase Regulation in Human Umbilical Vein Endothelial Cells 2012.
  4. Jo YH. The Expression of neuronal Nitric Oxide Synthase in Rennervared Recurrent Laryngeal Nerve: KDC:511.423 4; 2001.
  5. Kim YM. Nutritional directed regulation of nNOS expression in the rat paraventricular nucleus: KDC:519.9 4; 2003.
  6. HOWNG HK. The Effects of L-NAME Administrations on Nitric Oxide Synthase in Rabbit Submandibular and Sublingual Gland: An Immunoelectron Microscopic Study: KDC:511; 2007.
  7. Kim YS, CHOI DH, Choi TJ, Jang HS, Na CS, Sin HT, Lee KI, Kim SM, Pyo BS, and Yun DH. Effects of Acupuncture at the Sea Point on the Changes of Plasma and Tissue Levels of NO, nNOS, Norepinephrine in Rats. Korean journal of acupuncture 2012.
  8. Koo ST, Kim SK, Kim EH, Kim JH, Youn DH, and Lee BH et al. Acupuncture point locations for experimental animal studies in rats and mice. The Korean Journal of Meridian & Acupoint 2010;27:67-78.
  9. Yang SY. Development of Acupuncture Point Stimulation and Skin Resistance Systems. Myonggi University. Thesis for a doctorate; 2001.
  10. Zhuang W, Eby JC, Cheong M, Mohapatra PK, Bredt DS, and Disatnik MH et al. The susceptibility of muscle cells to oxidative stress is independent of nitric oxide synthase expression. Muscle Nerve 2001;24:502-11.
    Pubmed CrossRef
  11. Bredt DS. Endogenous nitric oxide synthesis: biological functions and pathophysiology. Free Radic Res 1999;31:577-96.
    Pubmed CrossRef
  12. Feng C. Mechanism of nitric oxide synthase regulation: electron transfer and interdomain interactions. Coord Chem Rev 2012;256:393-411.
    Pubmed KoreaMed CrossRef
  13. Huh Y, Heo K, Park C, and Ahn H. Transient induction of neuronal nitric oxide synthase in neurons of rat cerebral cortex after status epilepticus. Neurosci Lett 2000;281:49-50.
    CrossRef
  14. Koh JY, and Choi DW. Vulnerability of cultured corticalvneurons to damage by endotoxins, Differential susceptibility of neurons containing NADPH-diaphorase. J Neurosci 1993;8:2153-63.
  15. Bryan NS. Nitrite in nitric oxide biology: cause or consequence? A systems-based review. Free Radic Biol Med 2006;41:691-701.
    Pubmed CrossRef
  16. Choi YY, Kim JH, Jeon MK, Lim JA, Kim KS, and Shon IC. Effect of FOLIUM ARTEMISIAE ARGYI’herbal acupuncture on the expression of nNOS protein following transient forebrain ischemic injury in rats. The Korean Journal of Meridian & Acupoint 2004;21:15-27.
  17. Lee HM, Kim CH, and Kim YS. Acupoint combination-related changes of NADPH-d diaphorase and neuronal nitric oxide synthase in the brainstem and cerebellum of spontaneously hypertensive rats. The Journal of Korean Acupuncture & Moxibustion Society 2003;20:148-59.
  18. Kim HD, Nam SS, and Kim CH. Effect of electroacupuncture stimulation on activity of neuronal NOS in rats. The Journal of Korean Acupuncture & Moxibustion Society 2006;23:199-206.
  19. Kim JD, Kang SK, and Kim CW. The effects of acupuncture on and nNOS in the brain stem and cerebellum oF SHR. The Journal of Korea Acupuncture on Moxibustion Society 2004;21:1-12.
  20. Yim CY. Nitric oxide and cancer. The Korean Journal of Internal Medicine 2010;78:430-6.
  21. Lee BH, Baik DS, Yun SU, Shin JM, Kim JH, and Yun SY et al. Peripheral nitric oxide activity in patients with liver cirrhosis. The Korean Journal of Internal Medicine 2007;73:251-7.
  22. Dale P, Augustine GJ, Fitzpatrick D, Hall WC, Lamantia AS, Mcnamara JO, and Williams SM. Neuroscience. Seoul: World Science; 2007 p. 150.
  23. Jung IG, and Park WH. The effect of cognitive stress during maximal exercise on blood β-endorphine and norepinephrine concentrations. Journal of Sport and Leisure Studies 2006;27:285-91.
  24. Chung HC, Han MC, Park SK, Ahn SH, Kim KS, and Sohn ICl. Effects of norepinephrine and serotonin increase induced by acupuncture stimulation on the nitric oxide synthesis. The Journal of Korea Acupuncture on Moxibustion Society 1999;16:367-78.
  25. Youn DH, Park CK, Kim JS, Chae WS, and Na CS. Effects of acupuncture at the acupoint yongok(KI2), umgok(KI10), sobu(HT8), sohae(HT3) on aquaporin-2 expression, RSNA, MAP, HR, serum ANP, renin and norepinephrine in rats. The Korean Journal of Meridian & Acupoint 2004;21:1-14.


September 2018, 35 (3)